1.
RPS3A调控PEDV复制的分子机制研究,上海市自然基金,编号:经费:20万元,2021-2024
2.
PEDV与宿主细胞蛋白互作的分子基础研究,国家重点研发计划子课题(所属项目:新发与再现畜禽重大疫病的致病与免疫机制研究,课题:仔猪腹泻冠状病毒感染及其致病机理),编号:2016YFD0500102-7,经费:93万元,2016.7-2020.12
3.
小型猪动脉粥样硬化模型及可降解镁合金血管支架植入治疗的功效性研究,上海交通大学Agri-X基金,项目编号:上海交通大学Agri-X(2015),经费:40万元,2015.9-2018.8
4.
猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白介导细胞侵染的分子机制,国家自然科学基金面上项目,项目编号:31472211,经费90万元,2015.1-2018.12。
5.
新流行猪流行性腹泻病毒(PEDV)侵染细胞受体的鉴定及功能分析,上海市自然基金,项目编号:14ZR1421400,经费10万元,2014.6-2017.6。
RPA反应过程中,重组酶先与引物结合,寻找双链DNA中的同源序列,定位到同源序列后,发生链交换,启动DNA合成反应,单链结合蛋白(SSB)与亲本链结合,防止被进一步替换。合成的子代DNA重复合成过程,如此循环重复进而实现扩增。
RPA与PCR的引物设计区别在于引物的长度的不同,一般情况下RPA的引物长度是比PCR长,引物长度过短会影响重组酶的活性,单链结合蛋白需要寡寡核苷酸长度在30~35bp以上才能将其整合到双链DNA。模板的长度通常在90bp至400bp之间,由于引物长度限制在30bp至35bp之间,所以最佳扩增长度是100bp至200bp,并且尽量避免聚嘧啶和聚嘌呤的情况。此外,在引物的设计过程中,5’端尽量避免有多个鸟嘌呤(G),引物的GC含量在40%至60%之间;避免引物形成二聚体和二级结构。3’端错配若超过一个碱基,会影响RPA反应的进行。在引物两端和中心若有3个碱基发生错配,则会影响RPA反应的检测效率。
普通PCR检测方法耗时长,操作复杂,且对实验环境要求高。恒温体外核酸扩增技术使得现场核酸检测成为可能,操作简单,联合测流试纸检测方法,将核酸检测可视化,提升其检测的便捷性,同时优化后的核酸检测技术保障检测的灵敏性和特异性。使得养殖场PEDV监测便利,提高国内PED流行监测的水平和能力。